همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli

Authors

  • ابراهیمی, فیروز
  • حاجی زاده, عباس
Abstract:

Background and purpose: Clostridium botulinum bacteria produces seven types of botulinum neurotoxins among which types A, B, E and F are responsible for human botulism. One of the treatments for botulism is the inhibition of botulinum neurotoxins catalytic domain activity by inhibitors. In this study, botulinum neurotoxin type E catalytic domain has been cloned in pET28a vector and expressed in E. coli BL21 (DE3). Materials and methods: In order to cloning of the catalytic domain, the genomic DNA was extracted. The sequence was amplified by Polymerase chain reaction (PCR) and was inserted into pGEM-T Easy vector. Then, the recombinant vector was transferred to E. coli DH5α cells. Afterwards, the cloning product was removed from pGEM-T Easy vector and inserted into pET28a vector using ligation reaction. Finally, the recombinant pET28a was transferred into E. coli BL21 (DE3) cells. Expression of catalytic domain was studied in standard conditions. Results: The results of enzymatic digestion and PCR reaction confirmed that cloning and subcloning occurred in pGEM-T Easy and pET28a vectors, respectively. The process was verified by sequencing. Finally, expression of this sequence was confirmed by the sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot analysis. Conclusion: The cloning of the sequence was accurately conducted in pGEM-T Easy and pET28a vectors. Also, the results showed that the expression of this sequence has been performed properly.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در باکتری e.coli

سابقه و هدف: باکتری های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می کنند که تیپ های a، b، e و f منجر به بوتولیسم در انسان می شوند. یکی از روش های درمانی بوتولیسم می تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در وکتور بیانی pet28a همسانه سازی و در باکتری میزبان e. coli سویه bl21(de3)...

full text

همسانه سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع b باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری e. coli

پیش زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین ها دارای هفت سروتیپ از a – g می باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط bont/b استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده ی ناحیه اتصالی آن می باشد. چون دارای اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می باشد.مواد و روش ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت ncbi گر...

full text

همسانه‌سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli

   Backgrounds & Aims: Botulism is caused by botulinum toxin. The best way to avoid the neurotoxin syndrome caused by BONT/B is to use recombinant vaccine made of BONT/B binding domain because binding domain has sufficient epitops to stimulate immune response. Materials & Methods: Initially BONT/B binding domain gene sequence were obtained from GenBank. Then the primers were designed. PCR react...

full text

بررسی ایمنی‌زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال‌دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

Abstract Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate...

full text

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردی...

full text

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به‌منظور کاندید واکسن ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 22  issue 97

pages  148- 157

publication date 2013-02

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023